ウェスタンブロッティングに失敗した!ときに簡単にやり直す方法

ウェスタンブロッティングに失敗した!ときに簡単にやり直す方法

抗体を剥がすにはストリッピング!

ウェスタンブロッティングは、電気泳動から始まってメンブレンへのトランスファー、ブロッキング、一次・二次抗体反応を経て結果が得られます。1つのサンプルに対して複数の一次抗体を使いたい場合、その種類に応じたメンブレンを準備する必要があります。しかしサンプル量が限られている、電気泳動~トランスファーの手間や時間がかかる、というところで悩むことがあると思います。あるいはターゲットの検出がうまくいかず、ブロッキングや抗体の希釈率を検討したい場合もあるかもしれません。

そんなときに便利な技術が、ターゲット分子の検出を終えたメンブレンから抗体(一次抗体・二次抗体)を剥がすストリッピングです。ストリッピングを行うことで、転写済みの同じメンブレン上で再び抗体反応を行うことができ、電気泳動と転写の手間を省くことができます

従来のストリッピングバッファーはメルカプトエタノールや変性剤を含み、抗体を剥離する際にメンブレン上の抗原にダメージを与えるため、再ブロッキングを必要としたり、再プローブで抗体濃度を高めたり、フィルムへの感光時間を延長する必要があるとされます。場合によっては、抗体の反応効率が著しく低下することがあります。

弊社製品であるRestore Western Blot Stripping Bufferは、ウェスタンを簡単にやり直すことができる試薬としてご好評をいただいております。こちらの製品はメルカプタンを含まないマイルドな組成で抗体を剥離するため、抗原を傷めることもありません。一次抗体のアフィニティの強さにもよりますが、5-15分間でストリップが完了します。また、その次の抗体で検出の際は通常、ブロッキングをやり直す必要はありません。Restore Western Blot Stripping Bufferでは剥がれないような高アフィニティの抗体に対しては、Restore Plus Western Blot Stripping Bufferがあります。こちらの製品ではストリッピング後の再ブロッキングが必要です

Restore Western Blot Stripping Bufferの特長

  • 効率的な抗体除去:独自開発したバッファーが効果的に作用し、抗体を除去します。通常ストリッピングは約10分で完了します。
  • 穏和な試薬:抗体除去の際に抗原へのダメージが少なく、次の抗体反応への影響はほとんどありません。
  • 労力の節約:転写済みのメンブレンを再利用するため、電気泳動・転写の手間を省くことができます。
  • サンプルの節約:電気泳動の回数が少なくなる分、サンプルも節約できます。

【無料ダウンロード】タンパク質関連カタログまとめ

タンパク質定量ガイドやタンパク質抽出カタログ、タンパク質ゲル電気泳動テクニカルハンドブックなど、タンパク質研究に関連するカタログ・ハンドブックを一同にまとめました。PDFファイルのダウンロードをご希望の方は、下記ボタンよりお申し込みください。
ダウンロード

【ハンズオントレーニング絶賛受付中】基礎~先端技術まで実戦形式のトレーニング


弊社の最先端ラボで、実験のエキスパートが基礎から詳細丁寧にサポートします。

これからこれから新たな実験を始める方はもちろん、すでに実験をされていて

お困りの方や、基礎を見直したい方にもおすすめです。

▼例

・リアルタイムPCR
  
・細胞解析実験(細胞培養、蛍光イメージング、フローサイトメトリー ほか)
   
・タンパク質解析実験(ウェスタンブロッティング ほか)

・分子生物学的手法(RNA抽出、ゲノム編集 ほか)

・DNAシーケンス(次世代シーケンス、キャピラリDNAシーケンス)

・マイクロアレイ

上記以外にも多様なトレーニングを用意しております。

定員となり次第受付となりますので、お早めにお申し込みください!

↓↓ご興味のある方は、以下のバナーをクリックして詳細をご覧ください↓↓
TS seminar end of article v1

この記事に関する、ご意見・ご質問がございましたら、下記フォームからご連絡ください。

お名前 (必須)

メールアドレス (必須)

勤務先・所属先

題名

メッセージ本文

 確認ページはございません。内容をご確認の上チェックを入れてください

※送信ボタンを押した後に送信完了画面に切り替わらないことがありますが、送信は完了しておりますのでご安心ください。